一、背景介绍

        乙型肝炎

        乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染引起的疾病。HBV是一种嗜肝病毒，主要存在于肝细胞内，可引起肝细胞炎症、坏死和纤维化。HBV主要通过母婴、血液和性接触等途径传播。乙肝的临床表现多样化，据资料统计，乙肝病毒携带者如果治疗不及时，将有31.6％－60.1％转化成慢性肝炎，20.8％－56.3％的慢性肝炎患者将恶化成肝硬化、肝腹水，16.5％－51.1％的肝硬化患者将发生癌变。

        据WHO统计，全球约20亿人曾感染过HBV。其中，约有3.5亿人为慢性感染者。每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国目前HBV携带者约9300万人，其中约有2500至3000万人为慢性肝炎。

        乙肝的治疗

        抗病毒治疗是最常见的乙肝治疗方式。国内外公认的抗病毒药物主要有干扰素和核苷（酸）类药物两类。干扰素药物可以刺激细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强免疫细胞的活力，起到免疫调节作用。干扰素的优点是疗效相对持久，耐药变异较少。缺点是需要注射，且副作用较多。核苷（酸）类药物主要是在病毒DNA复制过程中与细胞核中的单核苷酸竞争性结合在DNA单链上，从而抑制或阻止病毒DNA的复制。它的优点是口服即可，且副作用较少。缺点是容易产生耐药性。

        乙肝病毒的耐药

        长期服用核苷（酸）类药物易产生耐药，主要核苷（酸）类药物的服用时间及其耐药发生率见表1。在用药过程中，患者体内HBV DNA及谷丙转氨酶（ALT）逐渐下降，继而达到一个平稳期，患者病情减轻。此时，HBV很难被完全清除，而是处于一个低复制非活动时期。随着用药时间的延长，对药物敏感的野生株数量下降，具有耐药突变的变异株因对药物不敏感，而得以不断复制、增加，从而导致HBV DNA及ALT重新上升，使得肝炎复发。病毒耐药变异及病毒突破的发生见图1。

        耐药发生的直接后果即为药物疗效的降低和丧失，具体表现为肝炎复发、肝病急性加重、肝硬化，甚至出现肝衰竭。因此，在用药过程中，需根据患者病情及各类指标的变化制定个性化的治疗方案。

图1 治疗过程中病毒耐药变异、病毒突破发生示意图（摘自《乙型肝炎病毒耐药专家共识：2009版》）

        乙肝病毒的分型

        根据HBV全基因组序列差异≥8%，或S区序列差异≥4%，可将HBV分为A至H八种基因型。不同型别在流行特征、致病性等方面存在差异。同时，HBV基因型与肝病临床表现、转归、严重程度和对抗病毒治疗的应答情况显著相关。

二、服务内容与临床意义

        1、HBV耐药基因检测
        检测与六种核苷（酸）类药物耐药相关的11个病毒变异位点的变异信息。

表3 华大HBV耐药基因检测覆盖范围

        临床意义：

        （1）在初始治疗前检测，有助于判断是否感染耐药突变株，可以帮助选择初治药物；

        （2）在治疗过程中检测，有助于及时发现基因型耐药，从而采取预防措施，避免发生病毒反弹；

        （3）耐药发生后检测，可根据耐药情况及时换药加药或更改治疗方案，使患者获得更好的治疗效果。

        耐药检测建议：

        （1）在使用核苷（酸）类药物治疗前，先做一次耐药检测，以确定用药种类；

        （2）在治疗的最初两年，对于轻微肝病患者，推荐每6个月检测一次；

        （3）两年后建议每3个月检测一次，因为这个时候出现耐药的可能性更高；

        （4）对病情较重的患者来说，耐药的后果会迅速表现出来，并可能威胁生命，因此建议每3个月检测一次。

        2、HBV分型基因检测
        检测HBV八种基因型A、B、C、D、E、F、G、H。

        临床意义：

        （1）有助于预测疾病进展、判断病毒致病性、判断病程及转归：与C型感染者相比，B型患者较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌；

        （2）帮助选择治疗方案：对于干扰素治疗的应答率，B型高于C型，A型高于D型；

        （3）指导流行病学调查研究：基因型分布具有地域差异性。

 三、技术原理及优势

        技术原理：

        采用Sanger测序法对乙肝病毒进行耐药及分型基因检测。首先提取患者血液中的病毒 DNA，利用特异性引物对HBV DNA中的目的基因进行PCR扩增。采用Sanger测序法对扩增后的目的基因进行测序，将测序信息与NCBI中标准株的序列信息进行比对，从而获得HBV的型别信息及耐药位点的变异信息。

        技术特点：

        （1）测序法：耐药及分型检测的“金标准”，重复性达99%以上；

        （2）多位点：一次检测即可得到6种药物11个位点的变异信息；

        （3）多型别：一次检测即可进行A至H八种型别的精准分型；

        （4）灵敏度：变异株占10%即可进行检测。

        技术优势：

        （1）更早发现病毒耐药

        HBV耐药基因检测能够在耐药发生前，获得病毒耐药信息，从而帮助选择合适的治疗药物，及时采取预防措施，有效规避耐药发生的风险。

        （2）更全面的耐药监控

        HBV耐药基因检测可一次性检测6种核苷（酸）类药物相关的11个耐药位点的突变情况，并可发现新的耐药位点，提供更多更全面的耐药信息，科学指导用药

        （3）更全面的型别分析

        HBV基因分型检测可一次性检出乙肝病毒A、B、C、D、E、F、G、H八种基因型别，为疾病的治疗、预后等提供更多参考依据。

        （4）专家共识

        2010年《慢性乙型肝炎防治指南》已将基因分型和耐药突变株检测纳入到实验室检测项目当中。2010年《慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识》中指出，对于使用核苷（酸）类药物的患者，长期治疗的主要关注点就是耐药位点的出现。2013年，中华医学会针对乙肝耐药推出最新专家共识《核苷和核苷酸类药物治疗慢性乙型肝炎的耐药及其管理》。

四、服务流程与样本要求

        服务流程：

        样本要求：

        检测周期：
        HBV耐药及基因分型检测：5个工作日

五、常见问题

        1、进行乙肝耐药和分型检测需要空腹吗？

        答：不需要，保持正常生活习惯即可。该检测主要是提取血液中乙肝病毒DNA进行检测，不涉及血液中其他成分。只要病毒载量达到检测要求即可，不需要空腹。

        2、我刚开始服用核苷（酸）类药物，可以做耐药检测吗？

        答：病毒耐药预防是关键。耐药发生后再换药或加药，会增加对新服用药物的耐药风险。因此，对于使用核苷（酸）类药物进行抗病毒治疗的患者，应定期做HBV耐药检测，对耐药情况进行监测，一旦出现HBV耐药变异株，即应引起注意，采取预防措施。

        3、我委托华大临床检验中心进行乙肝相关的检测，华大是否可以对我的私人信息保密？

        答：在我们和客户签署的服务合同中，包括“保密和备份”这一内容。我们承诺完全尊重和保护患者的隐私权，包括患者的个人信息和检测所涉及的相关信息、数据、结果等。